Testarea prenatală neinvazivă pentru aneuploidii fetale – trisomie 13, 18, 21, prezența cromozomului Y (Veracity)

Informaţii generale şi recomandări

Testul VERACITY este un test prenatal non-invaziv de nouă generație dezvoltat în laborator pentru detectarea aneuploidiilor cromozomiale fetale și a microdelețiilor aplicabil pentru sarcinile unice și gemelare. Folosește o tehnologie brevetată bazată pe cercetarea și dezvoltarea de ultimă generație din domeniul geneticii și a diagnosticării moleculare. A fost dezvoltat de o echipă știinţifică cu o experienţă de peste 25 de ani în domeniul diagnosticului prenatal, medicinei moleculare, genomicii, transcriptomicii, metilomicii și bioinformaticii.

ADN-ul fetal liber circulant ce reprezintă aproximativ 3-13% din ADN-ul matern liber total, derivă probabil în mare parte din placentă şi dispare în decurs de câteva ore după naşterea fătului¹. Testul VERACITY măsoară cu acuratețe ADN-ul extracelular liber fetal din sângele matern pentru a detecta prezența aneuploidiilor fetale.

Prezenţa ADN-ului fetal în plasma maternă a fost demonstrată pentru prima dată de către Lo et al. în 1997, utilizând ca model secvenţele ADN ale cromozomului Y provenite de la un făt de sex masculin², fiind ulterior confirmată şi de către alţi cercetători^3;4. Această descoperire a arătat că ADN-ul matern din plasmă reprezintă un amestec himeric de ADN matern şi fetal. Înainte de demonstrarea acestui himerism al ADN-ului, probele de plasmă maternă nu reprezentau o sursă pentru analiza moleculară, investigatorii fiind interesaţi doar de celulele fetale nucleate din circulaţia maternă⁵.

Testul VERACITY examinează sângele periferic matern pentru detectarea, după săptămâna a 10-a de sarcină, a celor 3 aneupoidii cromozomiale fetale majore: trisomie 21, 18 şi 13⁶ și este disponibil pentru sarcini monofetale sau gemelare, inclusiv pentru cele concepute prin fertilizare in vitro (FIV)⁶.

Facultativ, testul oferă și alte opțiuni de testare, care includ: aneuploidiile X, Y, a microdelețiile (DiGeorge, deleția 1p36, Smith-Magenis, Wolf Hirschhorn) și sexul fetal⁶.

Investigaţia fiind neivazivă este evitat riscul de avort şi infecţie intrauterină asociat cu testarea prenatală invazivă (prin amniocenteză sau prelevarea de vilozităţi coriale) iar detectarea aneuploidiilor fetale permite intervenţia precoce⁶.

Recomandări de testare

• Vârsta maternă mai mare de 35 de ani
• Evidențierea unui risc crescut de anomalii cromozomiale în urma screening-ului efectuat prin dublu sau triplu test
• Ecografia fetală anormală
• Nașterea anterioară a unui copil cu anomalii cromozomiale
• Fertilizare in vitro
• Paciente cu contraindicație pentru metodele invazive de diagnostic prenatal
• Istoric familial pozitiv pentru anomalii cromozomiale^1;6

Pregătire pacientă:

Se recomandă ca medicul trimiţător să efectueze o consiliere corespunzătoare pretestare.

Pacienta trebuie să prezinte o ecografie care să facă dovada vârstei gestaționale.

Testul poate fi efectuat între săptămâna a 10-a** și săptămâna a 24-a de sarcină. Se recomandă ca medicul trimiţător să furnizeze informaţii ecografice detaliate care estimează săptămânile de sarcină, în special pentru sarcina incipientă. ^6;8

Înaintea recoltării probei pacientele vor completa obligatoriu 1 formular ce conține: formular informații probă, acordul pacientului informat, nota de informare privind prelucrarea de date cu caracter personal (ce includ informaţii despre utilitatea testării neinvazive prenatale, precum şi limitele acesteia).

În vederea recoltării probei nu este necesară o pregătire specială. Datorită particularităţilor sistemului de recoltare aceasta se va efectua însă numai la sediile Synevo.

Laboratorul Synevo oferă consiliere genetică în Centrul de recoltare Grozovici (Dr. Grozovici, nr. 6, sector 2, Bucureşti), cu programare la 021 9666.

Zilele de recoltare sunt: luni – miercuri: 7.00-14.00 pentru centrele din Bucureşti şi luni – marți pentru centrele din ţară, pe baza de programare la sediul fiecarui laborator.

Specimen recoltat – sânge venos⁷

Recipient de recoltare – vacutainer Streck-Cell-Free BCT⁷

Volum probă – câte 10 mL în fiecare dintre cele două eprubete prezente în kitul de recoltare⁷

Prelucrare necesară după recoltare – pentru a asigura optima omogenizare a sângelui efectuaţi 10 mişcări uşoare de inversiune a tubului⁷.

Stabilitate probă – în vederea asigurării stabilităţii probei până la sosirea în laboratorul unde se efectuează testarea, proba va fi menţinută la temperaturi de 6 – 24°C, în cutia originală⁷. Stabilitatea probei este de max. 4 zile.

Dacă proba se recoltează la centrele din ţară aceasta trebuie să ajungă în 24h la Laboratorul Central.

Interpretarea rezultatelor

Prin acest test se evaluează trisomiile 13, 18, 21, dar este, de asemenea, posibil să se raporteze şi alte aneuploidii cromozomiale sau sindroame de microdeleţie (22q11.2, 1p36, 17p11.2, 4p16.3). Rata de detecţie a acestor anomalii este apropiată, dar nu egală cu 100%.

Un rezultat „risc înalt” (pozitiv) pentru o anumită condiție genetică dintre cele analizate indică faptul că există o mare probabilitate (>99.9%) ca fătul să fie afectat de boala genetică respectivă. Deoarece Veracity nu este un test diagnostic, un rezultat pozitiv trebuie confirmat printr-un test de diagnostic prenatal din lichid amniotic sau vilozităţi coriale.

Deşi rata de detecţie este foarte mare un rezultat „risc scăzut” (negativ) nu poate exclude în totalitate posibilitatea unei afecțiuni genetice fetale.

În ceea ce priveşte detecţia aneuploidiilor cromozomilor sexuali acuratețea testului este de >99.9%^6;7.

Limite şi interferențe

Pentru sarcinile gemelare acuratețea rezultatelor pentru trisomiile 13,18 și 21 este de >99.9%. Dacă rezultatul este „risc înalt”, se sugerează că cel puţin unul dintre fetuşii gemeni are un risc crescut şi este nevoie de investigare suplimentară a ambilor fetuşi.

În cazul în care gravidei i s-au efectuat transfuzii cu sânge, transplant sau terapie cu celule stem, există posibilitatea obţinerii unui rezultat fals din cauza ADN-ului exogen.

Testele VERACITY nu pot evidenția:

• translocaţii cromozomiale echilibrate şi alte anomalii cromozomiale structural decât cele menționate mai sus
• poliploidii
• mozaicisme cromozomiale fetale şi/sau placentare în procent mic (adică prezenţa a două linii celulare cu un set diferit de cromozomi, cu o linie celulară slab reprezentată)
• defecte de metilare a ADN-ului^6;7.

Bibliografie

1. The American College of Obstetricians and Gynecologists. The Society for Maternal-Fetal Medicin. Commitee Opinion: Noninvasive Prenatal Screening for Fetal Aneuploidy. Number 545, December 2012. www.acog.org.
2. Lo YMD, Corbetta N, Chamberlain PF, Rai V, Sargent IL, Redman CWG, Wainscoat JS. Presence of fetal DNA in maternal plasma and serum. Lancet 1997; 350:485-487
3. SmidM, Lagona F, de Benassuti L, Ferrari A, Ferrari M, Cremonesi L. Evaluation of different approaches for fetal DNA analysis from maternal plasma and nucleated blood cells. Clin Chem1999; 45:1570-1572.
4. Houfflin-DebargeV, O’Donnell H, Overton T, Bennett PR, Fisk NM. High sensitivity of fetal DNA in plasma compared to serum and nucleated cells using unnested PCR in maternal blood. Fetal Diagn Ther 2000; 15:102-107.
5. Lo YMD. Fetal DNA in Maternal Plasma: Biology and Diagnostic Applications. Clin Chem. 2000 Dec;46(12):1903-6.
6. https://www.nipd.com/veracity/
7. Laborator Synevo. Referinţele specifice tehnologiei de lucru utilizate 2010. Ref Type: Catalog.